微升/纳升级液相色谱

Micro/Nano-HPLC



微升/纳升级高效液相色谱(Micro/Nano-HPLC)在现代实验室扩展传统高效液相色谱(HPLC)应用范围中扮演至关重要的角色。今天，Micro/Nano-HPLC或多或少在生物技术至环境分析广泛应用领域中已作为常规应用。例如，capLC-ESI-MS多肽谱图分析或血浆中重要的微量代谢物的分析。

  

Micro/Nano-HPLC相对于传统HPLC的特色和优势：

极高灵敏度
Micro/Nano-HPLC柱提供超高灵敏度是由于它的低扩散性。当进同样量的样品时，75 μm ID柱子在灵敏度上要比4.6 mm ID柱增加3760倍。分析物较小的峰体积，导致浓度灵敏检测器(紫外、荧光、电喷雾质谱)产生较高的响应。这种灵敏度的增加，对样品量有限的应用中准确定量经常是必须的。
再现性
Micro/Nano-HPLC色谱柱的选择性和柱效在使用新柱子替换用过的柱子时应保持一致。Micro/Nano-HPLC的一个突出优点就是可以用同一批填料能填装几千根柱子，消除了填料不同批次变化产生的问题。
检测限改善
当分析的样品量非常有限时，Micro/Nano-HPLC柱在连接含量敏感检测器(如ESI-MS)或应用柱后分离时提供了较低的检测限(LOD)。例如，0.5 mm ID的柱子检测限比4.6 mm ID柱子低85倍。在许多应用中，在样品量太少以至于根本无法用传统HPLC检测的情况下，必须使用Micro/Nano-HPLC。
减少废液
Micro/Nano-HPLC柱与传统规格的HPLC柱相比，有机溶剂的消耗大量减少。例如，1.0 mm ID柱子与传统4.6 mm ID柱子比较，流动相消耗减少21倍。
高温兼容性
Micro/Nano-HPLC的快速热传导对利用温度调节色谱能力是理想的。例如，使加热流动相简单化或根本不需要。高柱温增加质量扩散速度，因而改善柱效。一般来说，峰尖锐柱效得到改善。高温通常减小保留并因此不需要有机修饰剂，并经常在不失去柱效的情况下以较高流速执行分析。
液质联用时是最佳的
由于质谱仪要求被测的样品气化和离子化，如果色谱仪流速太大，气化和离子化将非常困难。而加热又对样品特性有所改变。Micro/Nano-HPLC色谱柱正好解决了这个问题。再加上Micro/Nano-HPLC色谱柱的高敏感性和高分辨率，体积又小，容易安装和连结，特别是毛细管柱子又有一定的柔韧性，因此，Micro/Nano-HPLC色谱拄用作液质联用是最佳的。另外，由于Micro/Nano-HPLC色谱柱的低流速，样品浓缩度高，用作离线样品收集和MALDI点样，然后再作质谱也是最佳的，而且会达到更高的样品检测覆盖率。
稳定性
尽管Micro/Nano-HPLC色谱柱在稳定性方面目前还不能与传统HPLC相媲美，但在许多次进样后仍然可以确保柱子性能的可靠，其选择性和柱效也是持续稳定的。只有在Micro/Nano-HPLC色谱柱在超过一定周期的使用后，仍保持其物理和化学稳定和色谱性能，它才能被日常常规分析方法所接受。通过适当的样品制备并使用预柱/柱切换，Micro/Nano-HPLC色谱柱可以接受几百次的进样。
减小柱长，快速分离
许多分离是在不牺牲基本柱效情况下可以使用较短柱子和较高流速。而且，在使用高选择检测器(如质谱仪)时，经常不需要基本柱效。但是，因为在离子源中存在可能的抑制效应，尤其是在分析复杂物质(如生物样品)时，从空体积/基质填充物中能够执行分析物质的分离应是首选的。